Seth vyštudoval Kent School v Connecticute. Potom išiel študovať animáciu na Rhode Island School of Design, ktorá ho inšpirovala k zasadeniu FAMILY GUY do mestečka Rhode Island. Na univerzite vytvoril krátky film Larryho Život (originál The Life of Larry), predchodcu Family Guy. Po promóciách oňho prejavila záujem Hanna-Barbera Production (tvorcovia TOM & JERRY) a neskôr pracoval ako animátor a spisovateľ pre seriály firmy Cartoon Network ako JOHNNY BRAVO, DEXTER‘S LABORATORY a COW AND CHICKEN. Napísal tiež animovanú verziu ACE VENTURA: ZVIERACÍ DETEKTÍV.
V roku 1996 MacFarlane vytvoril pokračovanie Larryho Života (pre Hanna-Barbera Cartoons) s názvom Larry and Steve, v ktorom účinkovali nemehlo Larry a vysoko inteligentný pes Steve. Ukážka bola vysielaná ako jedna z Cartoon Network's World Premiere Toons (Svetové premiéry animovaných seriálov na Cartoon Network). Vedúci pracovníci vo FOX videli obe Larryho ukážky a kontaktovali MacFarlana, aby vytvoril seriál založený na týchto postavách. A tak vznikol jeho prvý veľký projekt FAMILY GUY.
Po úspechu seriálu FAMILY GUY spolupracoval na tvorbe seriálu AMERICAN DAD! a sitcome THE WINNER, ktorý však bol po 6 dieloch oficiálne zrušený. Momentálne sa podieľa na tvorbe animovaného seriálu THE CLEVELAND SHOW, spin-offe seriálu FAMILY GUY. Je tiež fanúšikom Star Treku a objavil sa ako inžinier Ensign Rivers v STAR TREK: ENTERPRISE a v jednej epizóde GILMORE GIRLS. Daboval Wayna „The Main Brain“ McClaina v seriále AQUA TEEN HUNGER FORCE a tiež rôzne postavy v seriále ROBOT CHICKEN.
V súčasnosti je po uzavretí zmluvy s 20th Century Fox TV, ktorá by mala dosahovať hodnoty $100 miliónov dolárov, najlepšie plateným televíznym scenáristom. Je držiteľom Emmy Award ako americký animátor, scenárista, producent, režisér a dabér.
